La réaction du greffon contre l’hôte transfusionnelle (TA GVHD) est causée par les lymphocytes T contaminants présents dans les produits sanguins. L’irradiation gamma (IRRG) avec 2500 cGy est utilisée pour prévenir la TA GVHD. Pour les concentrés de plaquettes (CP) et le plasma, une méthode alternative à IRRG est le traitement photochimique (PCT) avec amotosalen/UVA (Intercept™ Blood System [IBS]) utilisé en Europe depuis plus de 10ans. Une autre méthode en développement pour les concentrés de globules (CGR) est le procédé IBS avec amustaline et GSH. Dans cette étude, nous avons évalué la capacité de l’amustaline/GSH d’inactiver les lymphocytes T dans les CGR pour prévenir la TA GVHD.

L’inactivation de lymphocytes T isolés de CGR traités par amustaline/GSH (0,2mM/20mM) avec incubation à température ambiante pendant 18–24h suivie d’une centrifugation et de l’échange du surnageant avec la solution additive AS-5 a été testée. Une méthode de dilution limite (LDA) comportant l’incorporation d’un analogue éthinyl désoxyuridine (EDU) fluorescent de thymidine en présence de cellules allostimulatrices (Click-iT^®) et identification des cellules viables en cytométrie de flux a été utilisée.

L’analyse a montré un signal fort (1–8×10⁴ cellules) associé à l’analyse des cellules viables non traitées qui ne pouvait être observé que lorsque les cellules allostimulatrices, l’EDU et le marquage fluorescent étaient utilisés ; tandis que le signal obtenu était négligeable lorsque l’un des réactifs manquait. Pas de signal (1–7 cellules) n’a été observé avec les échantillons tests (traités amustaline/GSH), ce qui indique que les cellules ont été incapables de proliférer. Il est prévu que si l’incubation des cellules est prolongée pendant 14jours, une plage dynamique plus grande sera atteinte.

Le traitement des cellules T avec amustaline/GSH résulte dans l’inactivation de≥4 log₁₀ de cellules T vs contrôle GSH seul.